ترایزول معرف یک مرحله ای که یک معرف یک واکنش آماده برای جداسازی RNA کل از سلول ها و بافت ها است. معرف ، یک محلول تک فاز از فنل و ایزوتیوسیانات گوانیدین ، بهبود روش جداسازی RNA تک مرحله ای است که توسط Chomczynski و Sacchi توسعه یافته است.
در حین همگن سازی یا تجزیه نمونه ، معرف ترایزول یکپارچگی RNA را حفظ می کند ، در حالی که سلول ها را مختل کرده و اجزای سلولی را حل می کند. افزودن کلروفرم به دنبال سانتریفیوژ ، محلول را به فاز آبی و فاز آلی جدا می کند. RNA منحصراً در فاز آبی باقی می ماند. پس از انتقال فاز آبی ، RNA با بارش با ایزوپروپیل الکل بازیابی می شود. پس از حذف فاز آبی ، DNA و پروتئین های موجود در نمونه را می توان با رسوب پی در پی بازیابی کرد. رسوب با اتانول DNA را از بین فاز و رسوب اضافی با ایزوپروپیل الکل ، پروتئین هایی را از فاز آلی تولید می کند. تصفیه همزمان DNA ممکن است برای عادی سازی عملکرد RNA از نمونه تا نمونه مفید باشد.
2. این تکنیک با مقدار کمی از بافت (100 50 50 میلی گرم) و سلول ها (106 5 5) ، و مقدار زیادی از بافت (³ 1 گرم) و سلول ها (> 107) از انسان ، حیوان ، گیاه یا باکتری به خوبی عمل می کند. اصل و نسب. سادگی روش معرف STEP-RNA امکان پردازش همزمان تعداد زیادی نمونه را فراهم می کند. کل روش را می توان در یک ساعت به پایان رساند. RNA کل جدا شده توسط یک معرف ترایزول عاری از پروتئین و آلودگی DNA است. می توان از آن برای تجزیه و تحلیل نوترن بلات ، هیبریداسیون نقطه نقطه ، انتخاب poly (A)+ ، ترجمه در شرایط آزمایشگاهی ، روش حفاظت RNase و شبیه سازی مولکولی استفاده کرد. برای استفاده در واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) ، درمان RNA جدا شده با درجه تقویت DNase I زمانی توصیه می شود که دو آغازگر در یک اگزون قرار داشته باشند.
3. ترایزول یک مرحله ای جداسازی تعدادی از گونه های RNA با اندازه مولکولی بزرگ یا کوچک را تسهیل می کند. به عنوان مثال ، RNA جدا شده از کبد موش ، الکتروفورز شده روی ژل آگارز ، و رنگ آمیزی شده با اتیدیوم بروماید ، نوارهای گسسته ای از RNA با وزن مولکولی بالا بین 7 کیلوبایت و 15 کیلو بایت (شامل mRNA و hnRNA) دو باند RNA ریبوزومی غالب را نشان می دهد. در k 5 kb (28S) و در ~ 2 kb (18S) ، و RNA با وزن مولکولی کم بین 0.1 تا 0.3 kb (tRNA ، 5S). RNA جدا شده وقتی در آب مقطر رقیق شود دارای نسبت A260/280 1.6 -1.8 است. عملکرد مورد انتظار RNA در هر میلی گرم بافت عبارت است از: کبد و طحال ، 10-6 6 میلی گرم. کلیه ، 3 ~ 4 میلی گرم ؛ ماهیچه های اسکلتی و مغز ، 1 ~ 5mg ؛ جفت ، 1 ~ 4 میلی گرم عملکرد مورد انتظار RNA از 1 × 106 سلولهای کشت شده: سلولهای اپیتلیال ، 8 ~ 15 میلی گرم است. فیبروبلاست ها ، 5 ~ 7 × میلی گرم هست.
اندازه کل محصول ترایزول:
BS409A (25 میلی لیتر)
BS410A (100 میلی لیتر)
تعداد ظروف: 1 عدد
شرایط حمل و نقل: فریزر
شرایط حمل و نقل: ICE
کد UNSPSC: 12352204UNSPSC
دسته: DNA پلیمرازها
نقد و بررسیها
هنوز بررسیای ثبت نشده است.