کیت استخراج RNA :معرف یک مرحله ای RNA یک معرف STEP-RNA یک واکنش آماده برای جداسازی RNA کل از سلول ها و بافت ها است. معرف ، یک محلول تک فاز از فنل و ایزوتیوسیانات گوانیدین ، بهبود روش جداسازی RNA تک مرحله ای است که توسط Chomczynski و Sacchi توسعه یافته است. در حین همگن سازی یا تجزیه نمونه ، یک معرف STEP-RNA یکپارچگی RNA را حفظ می کند ، در حالی که سلول ها را مختل کرده و اجزای سلولی را حل می کند. افزودن کلروفرم به دنبال سانتریفیوژ ، محلول را به فاز آبی و فاز آلی جدا می کند. RNA منحصراً در فاز آبی باقی می ماند. پس از انتقال فاز آبی ، RNA با ایزوپروپیل الکل بازیابی می شود.;کیت استخراج RNA پس از حذف فاز آبی ، DNA و پروتئین های موجود در نمونه را می توان با ته نشینی پی در پی بازیابی کرد. ته نشینی با اتانول DNA را از بین فاز و بارش اضافی با ایزوپروپیل الکل ، پروتئین هایی را از فاز آلی تولید می کند. تصفیه همزمان DNA ممکن است برای عادی سازی بازده RNA از نمونه به نمونه مفید باشد.
2. این تکنیک با مقدار کمی از بافت (100 50 50 میلی گرم) و سلول ها ، و مقدار زیادی از بافت و سلول ها (> 107) از انسان ، حیوان ، گیاه یا باکتری به خوبی عمل می کند. اصل و نسب. سادگی روش معرف STEP-RNA
امکان پردازش همزمان تعداد زیادی نمونه را فراهم می کند. کل روش را می توان در یک ساعت به پایان رساند. RNA کل جدا شده توسط یک معرف STEP-RNA عاری از پروتئین و آلودگی DNA است. می توان از آن برای تجزیه و تحلیل نورث لات ، هیبریداسیون نقطه نقطه ، انتخاب poly (A)+ ، ترجمه in vitro ، روش حفاظت RNase و شبیه سازی مولکولی استفاده کرد. برای استفاده در واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) ، درمان RNA جدا شده با درجه تقویت DNase I زمانی توصیه می شود که دو آغازگر در یک اگزون قرار داشته باشند.
3. یک معرف STEP-RNA جداسازی تعداد گونه های RNA با اندازه مولکولی بزرگ یا کوچک را تسهیل می کند. به عنوان مثال ، RNA جدا شده از کبد موش ، الکتروفورز شده روی ژل آگارز ، و رنگ آمیزی شده با اتیدیوم بروماید ، نوارهای گسسته ای از RNA با وزن مولکولی بالا بین 7 کیلوبایت و 15 کیلو بایت (شامل mRNA و hnRNA) دو باند RNA ریبوزومی غالب را نشان می دهد. در k 5 kb (28S) و در ~ 2 kb (18S) ، و RNA با وزن مولکولی کم بین 0.1 تا 0.3 kb (tRNA ، 5S). RNA جدا شده وقتی در آب مقطر رقیق شود دارای نسبت A260/280 1.6 ~ 1.8 است.
نقد و بررسیها
هنوز بررسیای ثبت نشده است.