آزمایش GGT (گاما گلوتامیل ترانسفراز) :
آزمایش GGT (گاما گلوتامیل ترانسفراز) :
این تست با عناوینی مثل GGT، Gamma-Glutamyl Transpeptidase، GGTP ، Gamma-GT ، GTP نیز شناخته می شود
آزمایش GGT (گاما گلوتامیل ترانسفراز) :
این تست با عناوینی مثل GGT، Gamma-Glutamyl Transpeptidase، GGTP ، Gamma-GT ، GTP نیز شناخته می شود
آزمایش لیپاز Lipase : پانکراتیت حاد شایع ترین عامل افزایش سطح لیپاز می باشد. این آنزیمی می باشد که برای تجزیه تری گلیسریدها به اسید چرب توسط لوزالمعده به دوازدهه ترشح می شود.
آلودگی کشتهای سلولی به راحتی شایعترین مشکلی است که در آزمایشگاههای کشت سلولی با آن مواجه میشویم و گاهی اوقات عواقب بسیار جدی در پی دارد. آلایندههای کشت سلولی را میتوان به دو دسته اصلی، آلایندههای شیمیایی مانند ناخالصیهای موجود در محیط، سرم و آب شامل اندوتوکسینها، نرمکنندهها و مواد شوینده و آلایندههای بیولوژیکی مانند باکتریها، کپکها، مخمرها، ویروسها و مایکوپلاسماها تقسیم کرد. به عنوان آلودگی متقابل توسط رده های سلولی دیگر است . در حالی که حذف کامل آلودگی غیرممکن است، می توان با به دست آوردن درک کامل از منابع آنها و با پیروی از تکنیک خوب آسپتیک، فراوانی و جدیت آن را کاهش داد. در این بخش مروری بر انواع عمده آلودگی بیولوژیکی ارائه می شود.
باکتری ها گروه بزرگ و همه جا از میکروارگانیسم های تک سلولی هستند. آنها معمولاً چند میکرومتر قطر دارند و می توانند اشکال مختلفی داشته باشند، از کره ای گرفته تا میله و مارپیچ هست به دلیل وجود در همه جا، اندازه و سرعت رشد سریع، باکتری ها، در مقایسه با مخمرها و کپک ها، رایج ترین آلاینده های بیولوژیکی هستند که در کشت سلولی با آن مواجه می شوند. آلودگی باکتریایی به راحتی با بازرسی بصری کشت ظرف چند روز پس از آلوده شدن آن شناسایی می شود. کشت های آلوده معمولاً کدر به نظر می رسند، گاهی اوقات با یک لایه نازک روی سطح هستند افت ناگهانی در pH محیط کشت نیز اغلب مشاهده می شود. در یک میکروسکوپ کم قدرت، باکتری ها به صورت دانه های ریز بین سلول ها ظاهر می شوند و مشاهده زیر یک میکروسکوپ با قدرت بالا می تواند اشکال تک تک باکتری ها را مشخص کند.
تصاویر شبیه سازی شده با کنتراست فاز از 293 سلول چسبنده آلوده به E. coli. فضاهای بین سلول های چسبنده گرانول های ریز و درخشان را در زیر میکروسکوپ کم توان نشان می دهد، اما تک تک باکتری ها به راحتی قابل تشخیص نیستند (پانل A). بزرگنمایی بیشتر ناحیه محصور شده توسط مربع سیاه، سلول های اکلای را که معمولاً میله ای شکل هستند و حدود 2 میکرومتر طول و 0.5 میکرومتر قطر دارند،
آلودگی کشت با مخمرها :
مخمرها میکروارگانیسمهای یوکاریوتی تک سلولی در قلمرو قارچها هستند که اندازه آنها از چند میکرومتر (معمولا) تا 40 میکرومتر (به ندرت) متغیر است. مانند آلودگی باکتریایی، کشت های آلوده به مخمر کدر می شوند، به خصوص اگر آلودگی در مرحله پیشرفته باشد. تغییر بسیار کمی در pH کشت آلوده به مخمر تا زمانی که آلودگی سنگین شود، در این مرحله معمولاً pH افزایش می یابد. در زیر میکروسکوپ، مخمر به صورت ذرات بیضی شکل یا کروی ظاهر می شود که ممکن است ذرات کوچکتری را جوانه بزنند.
آلودگی کشت با کپک ها :
کپک ها میکروارگانیسم های یوکاریوتی در قلمرو قارچ ها هستند که به صورت رشته های چند سلولی به نام هیف رشد می کنند. شبکهای از این رشتههای چند سلولی حاوی هستههای ژنتیکی یکسان هستند و به آنها کلنی یا میسلیوم میگویند. مشابه آلودگی مخمری، pH کشت در مراحل اولیه آلودگی ثابت می ماند، سپس به سرعت افزایش می یابد زیرا کشت به شدت آلوده می شود و کدر می شود. در زیر میکروسکوپ، میسلیوم ها معمولاً به صورت رشته های نازک و ضخیم و گاهی متراکم تر ظاهر می شوند.
توده هاگ هاگ های بسیاری از گونه های کپک می توانند در محیط های بسیار خشن و نامناسب در مرحله خواب خود زنده بمانند، فقط در صورت مواجهه با شرایط رشد مناسب فعال می شوند.
آلودگی کشت با ویروس ها:
ویروس ها عوامل عفونی میکروسکوپی هستند که ماشین آلات سلول میزبان را برای تولید مثل در اختیار می گیرند. اندازه بسیار کوچک آنها تشخیص آنها را در کشت و حذف آنها از معرفهای مورد استفاده در آزمایشگاههای کشت سلولی بسیار دشوار می کند. از آنجایی که بیشتر ویروسها نیازمندیهای بسیار سختگیرانهای برای میزبان خود دارند، معمولاً روی کشتهای سلولی گونههایی غیر از میزبان خود تأثیر منفی نمیگذارند. با این حال، استفاده از کشت های سلولی آلوده به ویروس می تواند یک خطر جدی برای سلامت پرسنل آزمایشگاه ایجاد کند، به خصوص اگر سلول های انسان یا پستانداران در آزمایشگاه کشت شوند. عفونت ویروسی کشت های سلولی را می توان با میکروسکوپ الکترونی، رنگ آمیزی ایمنی با پانل آنتی بادی، سنجش ELISA یا PCR با پرایمرهای ویروسی مناسب تشخیص داد.
آلودگی با مایکوپلاسما :
مایکوپلاسماها باکتری های ساده ای هستند که فاقد دیواره سلولی هستند و کوچکترین ارگانیسم خودتکثیر شونده در نظر گرفته می شوند. به دلیل اندازه بسیار کوچک آنها (معمولاً کمتر از 1 میکرومتر)، شناسایی مایکوپلاسماها تا زمانی که به تراکم بسیار بالایی دست یابند و باعث تخریب کشت سلولی شوند بسیار دشوار است. تا آن زمان، اغلب هیچ نشانه قابل مشاهده ای از عفونت وجود ندارد. برخی از مایکوپلاسماهای با رشد آهسته ممکن است بدون ایجاد مرگ سلولی در کشت باقی بمانند، اما می توانند رفتار و متابولیسم سلول های میزبان در کشت را تغییر دهند.
عفونتهای مزمن مایکوپلاسما ممکن است خود را با کاهش نرخ تکثیر سلولی، کاهش چگالی اشباع و آگلوتیناسیون در کشتهای سوسپانسیون نشان دهند. با این حال، تنها راه مطمئن برای تشخیص آلودگی به مایکوپلاسما، آزمایش دورهای کشتها با استفاده از رنگآمیزی فلورسنت (مانند رنگآمیزی Hoechst 33258)، الایزا، PCR، رنگآمیزی ایمنی، اتورادیوگرافی، یا سنجشهای میکروبیولوژیکی است.
آلودگی متقاطع کشت سلول :
در حالی که به اندازه آلودگی میکروبی رایج نیست، آلودگی متقاطع گسترده بسیاری از رده های سلولی با HeLa و سایر رده های سلولی با رشد سریع، یک مشکل آشکار با عواقب جدی است. دریافت خطوط سلولی از بانکهای سلولی معتبر، بررسی دورهای ویژگیهای خطوط سلولی و انجام تکنیکهای خوب آسپتیک، اقداماتی هستند که به شما در جلوگیری از آلودگی متقاطع کمک میکنند. انگشت نگاری DNA، تجزیه و تحلیل کاریوتایپ، و آنالیز ایزوتیپ می تواند وجود یا عدم وجود آلودگی متقاطع را در کشت های سلولی شما را تایید کند.
استفاده از آنتی بیوتیک برای آلودگی کشت سلول :
آنتی بیوتیک ها هرگز نباید به طور معمول در کشت سلولی مورد استفاده قرار گیرند، زیرا استفاده مداوم از آنها باعث ایجاد سویه های مقاوم به آنتی بیوتیک می شود و اجازه می دهد تا آلودگی در سطح پایین باقی بماند، که می تواند پس از حذف آنتی بیوتیک از محیط به آلودگی در مقیاس کامل تبدیل شود و ممکن است پنهان شود. عفونت های مایکوپلاسما و سایر آلاینده های پنهان علاوه بر این، برخی از آنتی بیوتیک ها ممکن است با سلول ها واکنش متقابل داشته باشند و با فرآیندهای سلولی مورد بررسی تداخل کنند.
آنتی بیوتیک ها فقط باید به عنوان آخرین راه حل و فقط برای کاربردهای کوتاه مدت استفاده شوند و باید در اسرع وقت از کشت حذف شوند. اگر آنها در طولانی مدت استفاده شوند، کشت های عاری از آنتی بیوتیک باید به طور موازی به عنوان کنترلی برای عفونت های مرموز نگهداری شوند.
تجهیزات کشت سلولی : الزامات خاص یک آزمایشگاه کشت سلول عمدتاً به نوع تحقیق انجام شده بستگی دارد. برای مثال، نیازهای آزمایشگاه کشت سلولی پستانداران متخصص در تحقیقات سرطان با نیازهای آزمایشگاه کشت سلولی حشرات که بر بیان پروتئین تمرکز دارد کاملاً متفاوت است. با این حال، همه آزمایشگاههای کشت سلولی این نیاز مشترک را دارند که عاری از میکروارگانیسمهای بیماریزا (یعنی آسپسیس) باشند و برخی از تجهیزات اولیه مشابهی را که برای کشت سلولها ضروری است به اشتراک بگذارند.
این بخش تجهیزات و لوازم رایج در اکثر آزمایشگاههای کشت سلولی و همچنین تجهیزات مفیدی را فهرست میکند که امکان انجام کار را با کارآمدتر یا دقیقتر فراهم میکند، یا امکان طیف وسیعتری از سنجش و آنالیز را فراهم میکند. توجه داشته باشید که این لیست شامل همه چیز نیست. الزامات هر آزمایشگاه کشت سلولی به نوع کار انجام شده بستگی دارد
هود کشت سلولی (به عنوان مثال، هود جریان آرام یا کابینت ایمنی زیستی)
• دستگاه انکوباتور (توصیه می شود دستگاه انکوباتور CO2 مرطوب)
• بن ماری
• سانتریفیوژ
• یخچال و فریزر (20- درجه سانتیگراد)
• شمارنده سلولی (به عنوان مثال، شمارنده خودکار Invitrogen™ Countess™ II
یا هموسیتومتر)
• میکروسکوپ اینورت
• نیتروژن مایع (N2) فریزر یا ظرف انجماد
• اتوکلاو
پمپ آسپیراسیون (پریستالتیک یا خلاء)
• PH متر
• قفسه های غلتکی (برای افزایش مقیاس کشت های تک لایه)
• میکروسکوپ کانفوکال
• فلوسایتومتری
• بیوراکتورها
• مکعب های سلولی
ظروف تیمار شده برای کشت سلولی (به عنوان مثال، فلاسک ها، پتری دیش، پلیت )
• پیپت و پیپتتور
• سرنگ و سوزن
• ظروف زباله
• محیط کشت ، سرم ها و معرف ها
• سلول ها
کاربرد کشت سلولی :کشت سلولی یکی از ابزارهای اصلی مورد استفاده در زیست شناسی سلولی و مولکولی است که سیستم های مدل عالی را برای مطالعه فیزیولوژی طبیعی و بیوشیمی سلول ها (به عنوان مثال، مطالعات متابولیک، پیری)، اثرات داروها و ترکیبات سمی بر سلول ها، و جهش زایی ارائه می دهد. و سرطان زایی همچنین در غربالگری و توسعه داروها و تولید در مقیاس بزرگ ترکیبات بیولوژیکی (مانند واکسن ها، پروتئین های درمانی) استفاده می شود.
مزیت استفاده از کشت سلولی برای هر یک از این کاربردها ثبات و تکرارپذیری نتایجی است که می توان با استفاده از دسته ای از سلول های کلونال به دست آورد.
تولید واکسن
یکی از مهمترین کاربردهای کشت سلولی در تحقیق و تولید واکسن است. توانایی رشد مقادیر زیادی ویروس در کشت سلولی در نهایت منجر به ایجاد واکسن فلج اطفال شد و سلولها هنوز در مقیاس وسیع برای تولید واکسن برای بسیاری از بیماریهای دیگر مانند هاری، آبله مرغان، هپاتیت B و سرخک استفاده میشوند. در زمانهای اولیه، محققان مجبور بودند از حیوانات زنده برای رشد ویروس فلج اطفال استفاده کنند، اما به دلیل توسعه تکنیکهای کشت سلولی، آنها توانستند کنترل بسیار بیشتری بر تولید ویروس و در مقیاسی بسیار بزرگتر به دست آورند که در نهایت واکسنها و درمانهای مختلف را توسعه دادند. با این حال، خطوط سلولی پیوسته در تولید ویروس برای واکسنهای انسانی استفاده نمیشوند، زیرا این واکسنها از بافت بدخیم مشتق شدهاند یا دارای ویژگیهای بدخیم هستند.
کشت سلولی به طور گسترده ای برای انتشار ویروس ها استفاده می شود زیرا در مقایسه با حیوانات دیگر راحت، اقتصادی و آسان است. مشاهده اثرات سیتوپاتیک و انتخاب سلول های خاصی که ویروس روی آنها رشد می کند و همچنین بررسی چرخه عفونی آسان است. خطوط سلولی برای تحقیقات ویروسی مناسب هستند زیرا مواد سلولی به طور مداوم در دسترس هستند. رده های سلولی پیوسته در پرورش بسیاری از ویروس هایی که قبلاً رشد آنها دشوار یا غیرممکن بود، بسیار مفید بوده است.
زیست شناسی سلولی و مولکولی
کشت سلولی یکی از ابزارهای اصلی مورد استفاده در زیست شناسی سلولی و مولکولی است که سیستم های مدل عالی برای مطالعه فیزیولوژی طبیعی و بیوشیمی سلول ها (به عنوان مثال، مطالعات متابولیک، پیری)، اثرات ترکیبات سمی مختلف بر روی سلول ها، و جهش زایی و سرطان زایی مزیت اصلی استفاده از کشت سلولی برای هر یک از این کاربردها سازگاری و تکرارپذیری نتایجی است که می توان با استفاده از دسته ای از سلول های کلونال به دست آورد.
در تحقیقات سرطان
سلول های طبیعی را می توان با روش هایی از جمله تشعشع، مواد شیمیایی و ویروس ها به سلول های سرطانی تبدیل کرد. سپس میتوان از این سلولها برای مطالعه دقیقتر سرطان و آزمایش درمانهای جدید بالقوه استفاده کرد
ژن درمانی
سلول های دارای ژن عملکردی را می توان به سلول هایی که دارای ژن غیرعملکردی هستند و از روش کشت سلولی برای آنها استفاده می شود جایگزین کرد.
مطالعات ایمونولوژیک
تکنیکهای کشت سلولی برای شناخت عملکرد سلولهای ایمنی مختلف، سیتوکینها، سلولهای لنفوئیدی و تعامل بین عوامل ایجادکننده بیماری و سلولهای میزبان استفاده میشوند.
خطوط سلولی همچنین در فناوری لقاح آزمایشگاهی (IVF)، پروتئین نوترکیب و انتخاب و بهبود دارو استفاده میشوند.
حساب کاربری ندارید؟
ایجاد یک حساب کاربری